ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЙ МЕТОД

ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЙ МЕТОД, способ разделения близких по свойствам веществ на основе их адсорпционной способности. Принцип метода был впервые предложен М. Цветом в 1906—1910 гг. для изучения пигментов листьев. Первоначально не получил распространения, но за последние годы (1931—34 гг.) вновь введен в обиход биохимической препаративной работы и оказался весьма ценным и плодотворным. В основе метода лежит принцип т. н. хроматографического адсорпционного анализа: исследуемый раствор окрашенных веществ пропускается через трубку, наполненную соответствующим адсорбирующим веществом (см. рисунок). При этом различные находящиеся в растворе вещества, в зависимости от своего «адсорпционного сродства» к взятому адсорберу, задерживаются на различных уровнях столба его. Уже это допускает нек-рое разделение смеси, но еще значительно лучше это удается сделать путем «проявления»: через трубку теперь пропускают ток того или иного чистого растворителя, к-рый элю-ирует и постепенно перемещает к нижнему концу трубки одни вещества, оставляя нетронутыми другие. Т.о. на протяжении столба адсорбера в трубке получают ряд резко разграниченных окрашенных зон, содержащих каждая одно определенное вещество из числа находившихся в первоначальной смеси,—получается т.н. хромато-грамма. Слои адсорбера с фиксированными в них отдельными компонентами последовательно выбирают из трубки (или, при небольшом диаметре ее, просто осторожно выталкивают столб адсорбера) и подходящим растворителем освобождают адсорбированные в каждой отдельной зоне вещества. По существу в основе метода.лежит принцип, широко примененный Вилыптеттером при изолировании, разделении и очистке ферментов: использование для разделения веществ тонких различий в их способности к адсорпции и элю-ции, к-рые при обычной адсорпционной методике не могут быть уловлены и использованы; поэтому X. м. позволяет разделять весьма близкие по своей природе и своим свойствам вещества, в частности смеси отдельных изомеров. По сравнению с обычными методами разделения X. м. имеет то большое преимущество, что у родственных веществ адсорпционные свойства в значительно большей мере зависят от конфигурации, чем напр. растворимость. Удается установить известные закономерности в- отношении зависимости между адсорбируе-мостью и строением вещества; особенно сказывается наличие кислорода в молекуле—чем выше его содержание, тем выше адсорпцион-ное сродство. В ряду родственных соединений, напр. различных каротиноидов, одни, с спиртовой функцией, адсорбируются углекислым кальцием, другие, с кетонной, эфирной функцией и углеводороды—гидроокисью алюминия. Вариируя адсорбер, первичный растворитель и проявитель, получают широкую возможность приспособляться к самым различным смесям исходных веществ. В качестве адсорберов при X. м. применяют различные формы гидроокиси алюминия, углекислый кальций, окись кальция, тальк, фосфаты и ряд других веществ; для разделения двух модификаций хлорофила особенно пригодным оказался измельченный тростниковый сахар. В качестве растворителей и проявителей пользуются бензином, петролейным эфиром, ацетоном, пиридином; для водных растворов X. м. еще мало разработан. Наибольшее применение X. м. нашел в области химии растительных и животных пигментов, напр. при изучении каротиноидов, хлорофила, флавинов, далее в области витаминов, поскольку нек-рые из них повиди-мому относятся к- упомянутым группам веществ; наконец и в области ферментов можно ожидать ценных результатов, хотя здесь затруднение создается тем обстоятельством, что X. м. непосредственно и удобно применим для разделения окрашенных веществ, для неокрашенных же выбор условий адсорпции и проявления и разделение хроматограммы по зонам возможен лишь косвенным путем. Частично б. м. тут окажется полезным прием, предложенный Каррером: наблюдение за флюоресценцией хроматограммы в ультрафиолетовом свете. Лит.: Цвет М., Хромофилы растительного и живот-т-ого мира, Варшава, 1910; Winterstein А. и. Stein G-., Fraktionierung imd Reindarstellung organischer Substanzen nach dem Prinzip der chromatographischen Acisorptionsan,alyse, Zeitschr. f. physiol. Chemie, В. ССХХ, 1933.                                                          В. Эигельгардт.